培育非转基因抗除草剂水稻品系，是实现直播稻田杂草绿色高效防控的关键技术手段。本研究通过EMS诱变处理GR051水稻种子，在苗期喷施除草剂高效氟吡甲禾灵进行抗性筛选，获得抗性突变体。对其进行目标基因测序分析发现，乙酰辅酶A羧化酶（ACCase）基因的开放阅读框存在一处点突变，第6114位碱基发生G→C的颠换，致使编码蛋白第2038位氨基酸由色氨酸（Trp）替换为半胱氨酸（Cys）。该突变形式为明确突变体的应用潜力，本研究进一步对M3群体开展除草剂抗性鉴定及农艺性状系统分析，结果显示，在喷施4倍田间使用剂量的高效氟吡甲禾灵后，突变体的核心农艺性状及产量相关指标均未出现显著性变化。综上，本研究成功挖掘出一种新的ACCase基因抗性突变位点，并创制出可稳定遗传的非转基因抗ACCase抑制剂类除草剂水稻新种质，该种质为抗除草剂水稻新品种的选育提供了重要的遗传资源，也为直播稻田杂草防控提供了新的技术方案。